氨基苯硼酸亲和填料,重塑透明质酸酶工业纯化新标准!!!

在本行业案例研究中,重组人透明质酸酶(rHuPH20)的纯化过程包含多个层析步骤:即阴离子交换层析(AEX)、疏水相互作用层析(HIC)、Astrea Bioseparations公司的氨基苯硼酸亲和层析,以及使用羟基磷灰石(HAP)进行最后的精制。

 

  一般纯化方法 优化后
纯化步骤 阴离子交换层析→疏水相互作用层析→羟基磷灰石→阳离子交换层析 阴离子交换层析→疏水相互作用层析→氨基苯硼酸亲和层析→羟基磷灰石
酶活 75000~132000 IU/mL 提高20-50%
纯度 90% 95%
HCP残留 1% 降低一个Log

 

氨基苯硼酸亲和填料可用于纯化含有顺式二羟基基团的分子,例如糖蛋白、碳水化合物、核酸和多酚。配基氨基苯硼酸在弱碱性条件下可以与含有顺式二羟基的分子形成可逆的共价键,可以通过降低pH值或者加入竞争性试剂将结合的分子分别洗脱下柱,从而实现其选择性纯化。

 

参数 产品详情 
柱体积 176 L
柱尺寸  高度 :35 厘米;直径:80 厘米
平衡缓冲液  5 mm 磷酸钾,0.5m硫酸铵,pH 7.0
样品加载条件 以50 cm/h的流速加载(蛋白质样品)
清洗步骤 5 mm 磷酸钾,0.5m硫酸铵,pH 7.0
20 mm 氨基酸,0.5m硫酸 铵,pH 9.0
20 mm 氨基酸,100mm氯化钠,pH 9.0
洗脱缓冲液 50 mm 肌醇,100mm氯化钠,pH 6.9

表1:商业化阶段,使用氨基苯硼酸亲和填料纯化重组人透明质酸酶(rHuPH20)的操作条件

 

透明质酸酶是一种广泛用于多种治疗制剂的重要糖蛋白。本应用案例摘自公开专利,研究展示了氨基苯硼酸亲和填料在重组透明质酸酶(rHuPH20)纯化过程中的应用,该应用已经成功放大到了商业化生产。通过形成可逆的共价键,氨基苯硼酸亲和填料以结合洗脱模式对重组透明质酸酶进行了精制,在大量去除宿主细胞蛋白(HCP)的同时,有效提高了酶的活性,并最大限度保持了分子结构的完整性。当与离子交换层析和疏水相互作用层析等互补的纯化技术结合使用时,氨基苯硼酸亲和填料有助于提高工艺产率并提升产品质量。其良好的可扩展性和可重复性使其成为生物制药研发和生产中的一项重要工具。

 

重组透明质酸酶(rHuPH20)由于其低免疫原性已成为现代生物制药的重要功能性原料药。其最成熟的应用是作为大分子药物递送辅料,解决单抗、融合蛋白等大分子皮下注射吸收差、给药体积受限的难题,成功实现曲妥珠单抗、利妥昔单抗等药物的静脉剂型皮下化改造,大幅简化给药流程、提升患者用药依从性。在肿瘤治疗领域,该酶可降解实体瘤高表达的透明质酸,降低肿瘤间质压力、破除基质屏障,有效提升化疗药、靶向药、免疫抑制剂及CAR-T细胞、溶瘤病毒的瘤内浸润与治疗效果,是实体瘤联合治疗的热门佐剂。此外,其还可辅助溶酶体贮积病酶替代疗法、纳米药物的组织递送,同时用于临床刺激性药物外渗的急救防护。

 

氨基苯硼酸亲和填料是Astrea Bioseparations公司的重磅产品,专为选择性结合含有顺式二羟基结构的分子(如糖蛋白和酶)而设计。可以有效捕获或去除糖蛋白,具有高动态结合载量的优点,填料耐碱性能优越,最高可使用1.0M的氢氧化钠进行在位清洁,大大提高了填料的使用寿命。

 

氨基苯硼酸亲和填料具有以下特点:

1.核心技术破局:专属亲和机制,精准锁定目标产物

2.工艺极致精简:量产效率翻倍升级

3.指标全面跃升:高酶活高纯度,筑牢药用级品质底线

4.工业级可落地:标准化参数,适配大规模量产

 

总结

氨基苯硼酸亲和填料凭借专属共价亲和技术,彻底解决了重组透明质酸酶纯化「收率低、流程繁、成本高、杂质难控的行业痛点。在rHuPH20作为大分子药物皮下递送核心辅料、肿瘤联合治疗热门佐剂的商业化爆发期,氨基苯硼酸亲和填料以更高的效率、更稳的品质、更低的成本,成为生物制药企业升级纯化工艺、提升市场竞争力的核心利器,为rHuPH20规模化、标准化、高质量量产提供全新标准化解决方案。

 

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氨基苯硼酸亲和填料(Aminophenylboronate A6XL)订购信息:

 

散装填料

货号 描述 规格
0355-00025 Aminophenylboronate A6XL 25mL
0355-00100 Aminophenylboronate A6XL 100mL
0355-00500 Aminophenylboronate A6XL 500mL
0355-01000 Aminophenylboronate A6XL 1000mL

 

 

实验室预装柱

货号 描述 规格
0355-00001 Aminophenylboronate A6XL-1mL Column 1mL
0355-00005 Aminophenylboronate A6XL-5mL Column 5mL